酶標儀的檢測原理

光是電磁波，波長(cháng)100nm～400nm稱(chēng)為紫外光， 400nm～780nm之間的光可被人眼觀(guān)察到，大子780nm稱(chēng)為紅外光。人們只所以能夠看到色彩，是因為光照射到物體上被物體反射回來(lái)。綠色植物之所以是綠色，是因為植物吸收了光中的紅色光譜。酶標儀測定的原理是在特定波長(cháng)下，檢測被測物的吸光值。
　　檢測單位：
　　光通過(guò)被檢測物，前后的能量差異即是被檢測物吸收掉的能量，特定波長(cháng)下，同種被檢測物的濃度與被吸收的能量成定量關(guān)系。
　　檢測單位用OD值表示， OD是optical delnsity（光密度）的縮寫(xiě)，表示被檢測物吸收掉的光密度， OD＝1og（1／trans），其中trans為檢測物的透光值。根據Bouger-amberT-beer法則，OD值與光強度成下述關(guān)系：
E＝OD=logΙ0/Ι其中E表示被吸收的光密度， Ι0 為在檢測物之前的光強度，Ι為從被檢測物出來(lái)的光強度。
　　OD值由下述公式計算：
　　E＝OD=C×D×E
　　C為檢測物的濃度
　　D為檢測物的厚度
　　E為摩爾因子
　　在特定波長(cháng)下測定每種物質(zhì)都有其特定的波長(cháng)，在此波長(cháng)下，此物質(zhì)能夠吸收多的光能量。如果選擇其它的波長(cháng)段，就會(huì )造成檢測結果的不準確。因此，在測定檢測物時(shí)，我們選擇特定的波長(cháng)進(jìn)行檢測，稱(chēng)為測量波
長(cháng)。
　　但是每種物質(zhì)對光能量還存在定的非特異性吸收，為了消除這種非特異性吸收，我們再選取個(gè)參照波長(cháng)，以消除這個(gè)不準確性。在參照波長(cháng)下，檢測物光的吸收小。檢測波長(cháng)和參照波長(cháng)的吸光值之差可以消除非特異性吸收。
　　Anthos 酶標儀檢測值計算
　　儀器中的檢測器接收透過(guò)被檢測物的光能量，轉換成進(jìn)位數字信號，大為4095。儀器定義沒(méi)有光源下的透光值為 0％，沒(méi)有檢測物的透光值為100％。則實(shí)際檢測中，檢測物的透光值均在 0％100％之間。透光值
的計算如下：
　　T＝（Meas—Min）／（Max—Min）
　　其中T為透光值， Meas為檢測的進(jìn)位數值， Min為在 0％的情況下檢測的進(jìn)位數值， Max為在100％的情況下檢測的進(jìn)位數值，舉例如下：
　　MaX=3600 Mn=20 Meas＝30
　　T=（30-20）/3600-20)＝0．0028
　　OD＝1og（1/T）=1og（1/0.0028）=2.552
　　Anthos 酶標儀的中心定位
　　儀器會(huì )自動(dòng)對酶標孔進(jìn)行中心定位，中心定位是要消除酶標孔底的凸凹引起的厚薄不均帶來(lái)檢測的不準確。在對每個(gè)酶標儀進(jìn)行檢測時(shí)，儀器其實(shí)要進(jìn)行35個(gè)點(diǎn)的測量，選取中間的5個(gè)點(diǎn)的均值為本孔的OD值。
　　光源的參照通道
　　參照通道是用來(lái)校準由于電壓不穩或燈泡磨損帶來(lái)的影響。
　　酶標儀的用途和其它提示
　　用于ELISA試劑的測定，廣泛用于各種實(shí)驗室，包括臨床實(shí)驗室。
　　質(zhì)量控制
　　質(zhì)量控制是試劑檢測的重要因素。請按照試劑說(shuō)明書(shū)的要求進(jìn)行質(zhì)量控制。
　　空白校正
　　有些試劑盒的說(shuō)陰書(shū)將空白孔設置為空氣，其它大多數空白孔的設置是用試劑來(lái)設置的，請按照試劑盒的說(shuō)明書(shū)要求進(jìn)行。
　　檢測結果的解釋
　　由于有相當多的因素會(huì )影響檢測的結果，如不同的酶標板，檢測試劑的體積，都會(huì )造成OD值的不同，因此，只有使用同酶標板反應的試劑檢測結果才能比較和分析。對結果的臨床解釋請依照試劑盒的說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。

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