PCR儀的選購

PCR的原理：

    DNA的半保留復制是生物進(jìn)化和傳代的重要途徑。雙鏈DNA在多種酶的作用下可以變性解鏈成單鏈，在DNA聚合酶的作用下，以單鏈為模版，根據堿基互補配對原則復制成新的單鏈，與模版配對成為雙鏈分子挎貝。在體外實(shí)驗中發(fā)現，DNA在溫時(shí)也可以發(fā)生變性解鏈，當溫度降低后又可以復性成為雙鏈。因此，通過(guò)溫度變化控制DNA的變性和復性，并設計與模板DNA的5’端結合的兩條引物，加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的體外復制，多次重復“變性解鏈—退火—合成延伸”的循環(huán)就可以以幾何數大量擴增特定的基因。

   從PCR原理可以看出，PCR儀的關(guān)鍵是升降溫的步驟?，F在偶爾還能聽(tīng)到些前輩們笑談早年的PCR實(shí)驗如何在3個(gè)水浴鍋中完成的趣聞。經(jīng)過(guò)不斷改進(jìn)，今天的PCR已經(jīng)越來(lái)越完善和智能化。出于市場(chǎng)推廣的戰略需要，各廠(chǎng)的PCR儀型號不同，著(zhù)力宣傳的技術(shù)指標和參數也不盡統，天呈在這里簡(jiǎn)單列出選購時(shí)我們認為應該考慮的常用指標，希望有助于大選購PCR儀的選購技巧。

PCR儀的種類(lèi)：

    PCR儀的種類(lèi)總體來(lái)說(shuō)可以分為兩大類(lèi)：PCR擴增儀和實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀，普通的PCR擴增儀又衍生出帶梯度PCR功能的梯度PCR儀、和帶原位擴增功能的原位PCR儀等等。

    PCR重要的就是個(gè)升降溫過(guò)程，初的水浴鍋式PCR，就是三個(gè)水浴箱，個(gè)機械臂，定時(shí)抓出反應槽轉換水浴鍋。這種儀器體積大，迅速慢，但其實(shí)結果并不比以后的PCR儀差。后來(lái)有人利用致冷和加熱做成了，固定位置升降溫的PCR擴增儀。

    后來(lái)隨著(zhù)定量技術(shù)的發(fā)展，有公司將擴增儀和檢測做成體，也就成了現在的實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀。1996年由ABI公司先推出將擴增和檢測融為體的實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀。

PCR儀的選購：

、溫度控制
    對普通PCR儀來(lái)說(shuō)，溫度控制主要是介質(zhì)問(wèn)題，理想的介質(zhì)是導熱性好、比熱大、接觸緊密的物質(zhì)。溫控指標主要是指溫度的準確性、均勻性、以及升降溫速度，對梯度PCR儀來(lái)說(shuō)，除了溫度的準確性和均勻性、升降溫速度以外，還必須考慮儀器在梯度模式和標準模式下是否具有同樣的溫度特性。關(guān)于溫度控制方面，作者將在以后的技術(shù)文章里詳細介紹。

、儀器的功能性和人性化設計
     當然是越簡(jiǎn)單方便的設計符合用戶(hù)的要求。

熱蓋——現在的PCR儀般均配備熱蓋，熱蓋溫度設為105℃，使樣品管頂部的溫度達到105℃左右，蒸發(fā)的反應液就不會(huì )產(chǎn)生凝集在管蓋上而改變反應體積，這樣用戶(hù)就無(wú)需再向反應管內加石蠟油，直接減少后繼反應的麻煩。如果是旋轉加壓的熱蓋就要特別小心，因為壓力到達時(shí)沒(méi)有明顯的提示，用戶(hù)需要根據經(jīng)驗將熱蓋旋到合適位置，不太容易掌握。如果過(guò)松，熱蓋沒(méi)有充分接觸反應管而影響結果；如果過(guò)緊，則會(huì )導致反應管變形，甚至可能造成熱蓋的機械故障。新的ESP技術(shù)是指熱蓋加熱時(shí)不接觸樣品管，避免加熱樣品管導致非特異產(chǎn)物，等加熱到設定溫度后熱蓋下降，將樣品管壓入加熱模塊，下降時(shí)間和壓力都由電子控制。

樣品基座——PCR反應多在0.2或者0.5的管子中進(jìn)行，多數PCR儀也配備了不同的可更換樣品槽適配不同的樣品管。eppendorf有個(gè)有趣的設計，個(gè)槽內帶有0.2和0.5兩種不同樣品孔，不需更換基座就可以分別使用兩種不同的反應管，或者96孔板，加原位適配器就可以變成原位PCR了。避免了換基座的麻煩。當然不同的反應管不可以同時(shí)使用的，因為度不同，熱蓋不能作用。ABI的9700就可以更換不同的樣品槽，樣品槽系列擴增到從0.5到標準96孔，到雙384孔板，分別適合不同的需要，相當靈活。

軟件——新的PCR儀都比較注重程序編寫(xiě)的簡(jiǎn)易性。大屏幕，顯示實(shí)時(shí)信息，***，記憶存儲多個(gè)程序、自動(dòng)斷電保護等都有助于實(shí)驗室中的復雜環(huán)境使用。程序儲存方面，有人覺(jué)得儲存程序的多少似乎意義不太大，但是對于實(shí)驗人員多、PCR儀每天運作頻繁的實(shí)驗室來(lái)說(shuō)，每個(gè)使用者獨立儲存自定義的PCR程序，確實(shí)能方便下次的調用，會(huì )節約些時(shí)間。

    綜合考慮，臺PCR儀選購的關(guān)鍵還是在于用戶(hù)自己的要求，有些功能可能都用不上或很少用，用戶(hù)需要仔細斟酌，畢竟是分錢(qián)分貨。