超聲破碎細胞常見(jiàn)問(wèn)題

如果是基質(zhì)菌絲的話(huà),好可以考慮用溶菌酶處理下。
般來(lái)講這幾種方法讀可以的:
,液氮研磨
,用french press破碎
三，超聲波破碎
四，溶菌酶處理預處理
為什么用塑料大試管,玻璃的不可以嗎？
答：不可以的。那么先讓我來(lái)解釋下超聲波細胞粉碎儀超聲破碎的原理吧。
    超聲波是物質(zhì)介質(zhì)中的種彈性機械波，它既是種波動(dòng)形式,又是種能量形式。超聲對細胞的作用主要有熱效應，空化效應和機械效應。熱效應是當超聲在介質(zhì)中傳播時(shí)，摩擦力阻礙了由超聲引起的分子震動(dòng)，使部分能量轉化為局部熱?？栈窃诔曊丈湎?，生物體內形成空泡，隨著(zhù)空泡震動(dòng)和其猛烈的聚爆而產(chǎn)生出機械剪切壓力和動(dòng)蕩。另外，空化泡破裂時(shí)產(chǎn)生瞬時(shí)溫壓，可使水蒸氣熱解離產(chǎn)生.OH自由基和.H原子，由.OH自由基和.H原子引起的氧化還原反應可導致多聚物降解、酶失活、脂質(zhì)過(guò)氧化和細胞殺傷。機械效應是超聲的原發(fā)效應，超聲波在傳播過(guò)程中介質(zhì)質(zhì)點(diǎn)交替地壓縮與伸張構成了壓力變化，引起細胞結構損傷。損傷作用的強弱與超聲的頻率和強度密切相關(guān)。所以如果使用玻璃管，可能會(huì )碎裂，而通常使用的是塑料試管。
    100g大腸桿菌溶于1L破碎液里，攪拌發(fā)現菌液發(fā)粘，菌體不能夠很好分散，用超聲波細胞粉碎儀破碎，加壓后，菌液不能進(jìn)入勻質(zhì)機，速度很慢，請問(wèn)是何原因？能有好的辦法解決，很好用勻質(zhì)機快速破碎菌體？
   答：將破碎液的量加大，不能很好分散可能是量太大 ，超聲處理5－10分鐘，菌液粘度即可大大降低，也可促進(jìn)菌體分散。不同型號的超聲波細胞破碎儀功率不樣，功率的大小決定了使用變幅桿的大小范圍，你使用多大的變幅桿就在設備的上調至該刻度！變幅桿的大小決定了處理量5ml下選3mm，5～50ml可選6～8mm，50ml以上選10mm的變幅桿，依此類(lèi)推！
酵母破碎的問(wèn)題
   答：般的PROTOCOL都是用超聲波細胞破碎儀破碎酵母細胞sigma G-8772 酵母破碎效果好的我所做過(guò)的方法中還是玻璃珠，效率很，而且對目的蛋白活性不會(huì )有什么影響。般應該用這個(gè)方法。 化學(xué)裂解的方法，10g酵母 加1ml的乙酸乙酯，充分攪拌至液體狀。此法的裂解效果不錯的加尿素裂解液，在破碎遇到的問(wèn)題是菌體濃度太低，OD620nm在4-6之間。細胞破碎儀的低破碎體積為4ml左右，這樣我再稀釋倍，我懷疑破碎完溶出蛋白和酶活測定時(shí)會(huì )測不準。破碎后，你可將液體放入透析袋中濃縮

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