熒光顯微鏡與普通光學(xué)顯微鏡區別及特性

    熒光顯微鏡與普通光學(xué)顯微鏡不同，它不是通過(guò)普通光源的照明觀(guān)察標本，而是利用定波長(cháng)的光(通常是紫外光、藍紫光)激發(fā)顯微鏡下標本內的熒光物質(zhì)，使之發(fā)射熒光，所以，熒光顯微鏡的光源所起的作用不是直接照明，而是作為種激發(fā)標本的內熒光物質(zhì)的能源。我們之所以能觀(guān)察標本，不是由于光源的照明，而是標本內熒光物質(zhì)吸收激發(fā)的光能后所呈現的熒光現象。由此可知，熒光顯微鏡的特點(diǎn)，主要是它的光源能供給大量特定波長(cháng)范圍的激發(fā)光，使受檢標本內的熒光物質(zhì)能獲得必要強度的激發(fā)光。同時(shí)，熒光顯微鏡必須具備相應的濾光鏡系統。熒光顯微鏡是**熒光組織化學(xué)的基本工具。它是由超壓光源、濾片系統(包括激發(fā)和壓制濾板)、光學(xué)系統和攝影系統等主要部件組成，是利用定波長(cháng)的光激發(fā)標本發(fā)射熒光。
1.激發(fā)熒光的方式：按光的波長(cháng)范圍分為UV激發(fā)法(使用紫外線(xiàn)照明法)和BV激發(fā)法(使用藍紫光)兩種。UV激發(fā)法是用短于400nm的近紫外光進(jìn)行激發(fā)。該法不存在可見(jiàn)的激發(fā)光，所以被觀(guān)察的熒光呈現該染料固有的熒光，容易判別標本上的特異熒光和背景組織的自身熒光。
2.BV激發(fā)法：是以404nm、434nm為中心的由紫外至藍光進(jìn)行激發(fā)。該方法使用藍光照射標本，所以熒光觀(guān)察系統的截止濾光片必須使用可完全阻斷藍光并可充分通過(guò)所需綠、黃熒光的濾光片。用于熒光抗體法的熒光色素。對于激發(fā)光的大吸收波長(cháng)和熒光的大發(fā)光波長(cháng)比較接近，所以BV激發(fā)法使用的濾光片必須使用銳截止式濾光片。該法可用藍光作為激發(fā)光，所以熒光色素的吸收效率較，可得到較明亮的圖像。其缺點(diǎn)是500nm以下的熒光無(wú)法看到，而500nm以上的使整個(gè)圖像顯黃色。在熒光抗體法中，大多以熒光色素特有的顏色來(lái)判斷其特異性，所以在討論微妙的特異性時(shí)，上述BV激發(fā)法的缺點(diǎn)往往影響大。

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