紫外分析儀的原理及其應用

日期：2024-07-25 15:49

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摘要：

紫外分析儀是熒光技術(shù)的應用，熒光技術(shù)是什么呢？　先了解下什么是熒光，熒光又作“螢光”，是指種光致發(fā)光的冷發(fā)光現象。當某種常溫物質(zhì)經(jīng)某種波長(cháng)的入射光（通常是紫外線(xiàn)或X射線(xiàn)）照射，吸收光能后進(jìn)入激發(fā)態(tài)，并且立即退激發(fā)并發(fā)出比入射光的的波長(cháng)長(cháng)的出射光（通常波長(cháng)在可見(jiàn)光波段）；而且旦停止入射光，發(fā)光現象也隨之立即消失。具有這種性質(zhì)的出射光就被稱(chēng)之為熒光。　知道了什么是熒光，顧名思義就能想到什么是熒光技術(shù)。熒光技術(shù)是某些物質(zhì)受定波長(cháng)的光激發(fā)后，在短時(shí)間內（10-8秒）會(huì )發(fā)射出波長(cháng)大于激發(fā)波長(cháng)的光，這種光稱(chēng)為熒光。這發(fā)光現象在各方面的應用及有關(guān)的方法稱(chēng)為熒光技術(shù)（fluorescent technique）。

　物質(zhì)經(jīng)過(guò)紫外線(xiàn)照射后發(fā)出熒光的現象可分為兩種情況，第種是自發(fā)熒光，如葉綠素、血紅素等經(jīng)紫外線(xiàn)照射后，能發(fā)出紅色的熒光，稱(chēng)為自發(fā)熒光；第種是誘發(fā)熒光，即物體經(jīng)熒光染料染色后再通過(guò)紫外線(xiàn)照射發(fā)出熒光，稱(chēng)為誘發(fā)熒光。

以往人們常用熒光偏振做指標來(lái)研究生物大分子動(dòng)力學(xué)。人們趨于用熒光偏振隨時(shí)間的衰減來(lái)研究這些問(wèn)題。在這種方法中，激發(fā)光不是連續的面偏振光，而是偏振的光脈沖，因此測得的F∥和F是在兩個(gè)不同方向上偏振的熒光隨時(shí)間的衰減，它既和熒光壽命τ有關(guān)，又與分子在溶液中的運動(dòng)有關(guān)，因此常表示為F∥（t）和F⊥（t）。由它們可得相當重要的物理量——各向異性參數A（t）。由A（t）可推測生物大分子的形狀、分子轉動(dòng)弛豫時(shí)間（即從個(gè)定向的狀態(tài)到個(gè)無(wú)定向狀態(tài)所要的時(shí)間），進(jìn)而可以推知生物大分子的大小、分子在溶液中的轉動(dòng)角度和時(shí)間之間的函數關(guān)系。由這些結果可以研究分子之間的相互作用、分子間結合的緊密程度、蛋白質(zhì)、核酸分子的解聚程度等等。　

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