影響電泳遷移率的因素介紹

那么下面上海嘉鵬科技有限公司為大家簡(jiǎn)單介紹一下關(guān)于影響電泳遷移率的因素介紹：

由電泳遷移率的公式可以看出，影響電泳分離的因素很多，下面簡(jiǎn)單討論一些主要的影響因素：

1. 待分離生物大分子的性質(zhì)

待分離生物大分子所帶的電荷、分子大小和性質(zhì)都會(huì )對電泳有明顯影響。一般來(lái)說(shuō)，分子帶的電荷量越大、直徑越小、形狀越接近球形，則其電泳遷移速度越快。

2. 緩沖液的性質(zhì)

緩沖液的 pH 值會(huì )影響待分離生物大分子的解離程度，從而對其帶電性質(zhì)產(chǎn)生影響，溶液 pH 值距離其等電點(diǎn)愈遠，其所帶凈電荷量就越大，電泳的速度也就越大，尤其對于蛋白質(zhì)等兩性分子，緩沖液 pH 還會(huì )影響到其電泳方向，當緩沖液 pH 大于蛋白質(zhì)分子的等電點(diǎn)，蛋白質(zhì)分子帶負電荷，其電泳的方向是指向正極。為了保持電泳過(guò)程中待分離生物大分子的電荷以及緩沖液 pH 值的穩定性，緩沖液通常要保持一定的離子強度，一般在 0.02 － 0.2 ，離子強度過(guò)低，則緩沖能力差，但如果離子強度過(guò)高，會(huì )在待分離分子周?chē)纬奢^強的帶相反電荷的離子擴散層（即離子氛），由于離子氛與待分離分子的移動(dòng)方向相反，它們之間產(chǎn)生了靜電引力，因而引起電泳速度降低。另外緩沖液的粘度也會(huì )對電泳速度產(chǎn)生影響。

3. 電場(chǎng)強度

電場(chǎng)強度（ V/cm ）是每厘米的電位降，也稱(chēng)電位梯度。電場(chǎng)強度越大，電泳速度越快。但增大電場(chǎng)強度會(huì )引起通過(guò)介質(zhì)的電流強度增大，而造成電泳過(guò)程產(chǎn)生的熱量增大。電流在介質(zhì)中所做的功（ W ）為：W=I2.R.t

上式中： I 為電流強度， R 為電阻， t 為電泳時(shí)間。

電流所作的功絕大部分都轉換為熱，因而引起介質(zhì)溫度升高，這會(huì )造成很多影響：

①樣品和緩沖離子擴散速度增加，引起樣品分離帶的加寬；②產(chǎn)生對流，引起待分離物的混合；③如果樣品對熱敏感，會(huì )引起蛋白變性；④引起介質(zhì)粘度降低、電阻下降等等。電泳中產(chǎn)生的熱通常是由中心向外周散發(fā)的，所以介質(zhì)中心溫度一般要高于外周，尤其是管狀電泳，由此引起中央部分介質(zhì)相對于外周部分粘度下降，摩擦系數減小，電泳遷移速度增大，由于中央部分的電泳速度比邊緣快，所以電泳分離帶通常呈弓型。降低電流強度，可以減小生熱，但會(huì )延長(cháng)電泳時(shí)間，引起待分離生物大分子擴散的增加而影響分離效果。所以電泳實(shí)驗中要選擇適當的電場(chǎng)強度，同時(shí)可以適當冷卻降低溫度以獲得較好的分離效果。

4. 電滲

液體在電場(chǎng)中，對于固體支持介質(zhì)的相對移動(dòng)，稱(chēng)為電滲現象。由于支持介質(zhì)表面可能會(huì )存在一些帶電基團，如濾紙表面通常有一些羧基，瓊脂可能會(huì )含有一些硫酸基，而玻璃表面通常有 Si-OH 基團等等。這些基團電離后會(huì )使支持介質(zhì)表面帶電，吸附一些帶相反電荷的離子，在電場(chǎng)的作用下向電極方向移動(dòng)，形成介質(zhì)表面溶液的流動(dòng)，這種現象就是電滲。在 pH 值高于 3 時(shí)，玻璃表面帶負電，吸附溶液中的正電離子，引起玻璃表面附近溶液層帶正電，在電場(chǎng)的作用下，向負極遷移，帶動(dòng)電極液產(chǎn)生向負極的電滲流。如果電滲方向與待分離分子電泳方向相同，則加快電泳速度；如果相反，則降低電泳速度。

5. 支持介質(zhì)的篩孔

支持介質(zhì)的篩孔大小對待分離生物大分子的電泳遷移速度有明顯的影響。在篩孔大的介質(zhì)中泳動(dòng)速度快，反之，則泳動(dòng)速度慢。

以上就是上海嘉鵬科技有限公司為大家整理總結關(guān)于影響電泳遷移率的因素介紹。

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