蛋白質(zhì)純化方法總結

分離純化某特定蛋白質(zhì)的般程序可以分為前處理、粗分、細分三步。
1.前處理：分離純化某種蛋白質(zhì)，先要把蛋白質(zhì)從原來(lái)的組織或細胞中以溶解的狀態(tài)釋放出來(lái)并保持原來(lái)的天然狀態(tài)（如果做不到呢？比如蛋白以包涵體形式存在），不丟失生物活性。為此，動(dòng)物材料應先提出結締組織和脂肪組織，種子材料應先去殼甚至去種皮以免手單寧等物質(zhì)的污染，油料種子好先用低沸點(diǎn)（為什么呢）的有機溶劑如乙醚等脫脂。然后根據不同的情況，選擇適當的方法，將組織和細胞破碎。動(dòng)物組織和細胞可用電動(dòng)搗碎機或勻漿機破碎或用超聲波處理破碎。植物組織和細胞由于具有纖維素、半纖維素和果膠等物質(zhì)組成的細胞壁，般需要用石英砂或玻璃粉和適當的提取液起研磨的方法或用纖維素酶處理也能達到目的。**細胞的破碎比較麻煩，因為整個(gè)**細胞壁的骨架實(shí)際上是個(gè)借共價(jià)鍵連接而成的肽聚糖囊狀大分子，非常堅韌。破碎**細胞壁的常用方法有超聲波破碎，與砂研磨、壓擠壓或溶菌酶處理等。組織和細胞破碎后，選擇適當的緩沖液把所要的蛋白提取出來(lái)。細胞碎片等不溶物用離心或過(guò)濾的方法除去。
如果所要的蛋白主要集中在某細胞組分，如細胞核、染色體、核糖體或可溶性細胞質(zhì)等，則可利用差速離心的方法將它們分開(kāi)，收集該細胞組分作為下步純化的材料。如果碰上所要蛋白是與細胞膜或膜質(zhì)細胞器結合的，則必須利用超聲波或去污劑使膜結構解聚，然后用適當介質(zhì)提取。
2. 粗分分離：當蛋白質(zhì)提取液（有時(shí)還雜有核酸、多糖之類(lèi)）獲得后，選用套適當的方法，將所要的蛋白與其他雜蛋白分離開(kāi)來(lái)。般這步的分離用鹽析、等電點(diǎn)沉淀和有機溶劑分分離等方法。這些方法的特點(diǎn)是簡(jiǎn)便、處理量大，既能除去大量雜質(zhì)，又能濃縮蛋白溶液。有些蛋白提取液體積較大，又不適于用沉淀或鹽析法濃縮，則可采用超過(guò)濾、凝膠過(guò)濾、冷凍真空干燥或其他方法進(jìn)行濃縮。
3.細分分離：樣品經(jīng)粗分分離以后，般體積較小，雜蛋白大部分已被除去。進(jìn)步純化，般使用層析法包括凝膠過(guò)濾、離子交換層析、吸附層析以及親和層析等。必要時(shí)還可選擇電泳法，包括區帶電泳、等電點(diǎn)聚焦等作為后的純化步驟。用于細分分離的方法般規模較小，但分辨率很。
結晶是蛋白質(zhì)分離純化的后步驟。盡管結晶過(guò)程并不能保證蛋白定是均的，但是只有某種蛋白在溶液中數量上占有勢時(shí)才能形成結晶。結晶過(guò)程本身也伴隨著(zhù)定程度的純化，而重結晶又可除去少量夾雜的蛋白。由于結晶過(guò)程中從未發(fā)現過(guò)變性蛋白，因此蛋白的結晶不僅是純度的個(gè)標志，也是斷定制品處于天然狀態(tài)的有力指標。
蛋白質(zhì)分離純化的方法：
、根據分子大小不同的純化方法
1、透析和超過(guò)濾
2、密度梯度離心
3、凝膠過(guò)濾
、利用溶解度差別的純化方法
1、等電點(diǎn)沉淀和pH控制
2、蛋白質(zhì)的鹽析和鹽溶
3、有機溶劑分分離法
4、溫度對蛋白質(zhì)濃度的影響
三、根據電荷不同的純化方法
1、電泳
2、聚丙烯酰胺凝膠電泳
3、毛細管電泳
4、等電聚焦
5、層析聚焦
6、離子交換層析
四、利用選擇性吸附的純化方法
1、羥磷石灰層析
2、疏水作用層析
五、利用配體的特異生物學(xué)親和力的純化方法
親和層析（affinity chromatography）：
a.凝集素親和層析
b.**親和層析
c.金屬螯合層析
d.染料配體層析
e.共價(jià)層析
六、效液相層析合快速蛋白質(zhì)液相層析