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PCR新手指南：復性溫度的選擇標準
日期：2024-07-31 14:12
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摘要：PCR新手指南：復性溫度的選擇標準
復性溫度的選擇標準應該是可擴增范圍的中間溫度。
在使用溫度梯度的方法尋找復性溫度時(shí)，新手往往會(huì )選擇擴增產(chǎn)物多的溫度條件，然而在此后的非梯度擴增時(shí)擴增效果又不太理想。出現這種現象的主要原因是復性溫度的選擇標準不對。本人10多年前做過(guò)數千個(gè)基因的擴增，通過(guò)溫度梯度實(shí)驗發(fā)現，能擴增出來(lái)的溫度范圍般在3-30度。選擇的標準應該是可擴增范圍的中間溫度。
因為：
1、擴增產(chǎn)物量的影響因素很多，有些是隨機的。從定量PCR的平臺期低的不規律可以看出來(lái)。
2、不同儀...
PCR新手指南：復性溫度的選擇標準
復性溫度的選擇標準應該是可擴增范圍的中間溫度。
在使用溫度梯度的方法尋找復性溫度時(shí)，新手往往會(huì )選擇擴增產(chǎn)物多的溫度條件，然而在此后的非梯度擴增時(shí)擴增效果又不太理想。出現這種現象的主要原因是復性溫度的選擇標準不對。本人10多年前做過(guò)數千個(gè)基因的擴增，通過(guò)溫度梯度實(shí)驗發(fā)現，能擴增出來(lái)的溫度范圍般在3-30度。選擇的標準應該是可擴增范圍的中間溫度。
因為：
1、擴增產(chǎn)物量的影響因素很多，有些是隨機的。從定量PCR的平臺期低的不規律可以看出來(lái)。
2、不同儀器、不同位置的溫度及溫度變化曲線(xiàn)是有差異的。按照儀器廠(chǎng)的出廠(chǎng)標準也準確性+-0.3度及均勻性+-0.3度
3、PCR儀進(jìn)行梯度擴增時(shí)的溫度準確性會(huì )更差
選擇中間溫度可以消除儀器溫度差的影響。
復性溫度的選擇標準應該是可擴增范圍的中間溫度。
在使用溫度梯度的方法尋找復性溫度時(shí)，新手往往會(huì )選擇擴增產(chǎn)物多的溫度條件，然而在此后的非梯度擴增時(shí)擴增效果又不太理想。出現這種現象的主要原因是復性溫度的選擇標準不對。本人10多年前做過(guò)數千個(gè)基因的擴增，通過(guò)溫度梯度實(shí)驗發(fā)現，能擴增出來(lái)的溫度范圍般在3-30度。選擇的標準應該是可擴增范圍的中間溫度。
因為：
1、擴增產(chǎn)物量的影響因素很多，有些是隨機的。從定量PCR的平臺期低的不規律可以看出來(lái)。
2、不同儀器、不同位置的溫度及溫度變化曲線(xiàn)是有差異的。按照儀器廠(chǎng)的出廠(chǎng)標準也準確性+-0.3度及均勻性+-0.3度
3、PCR儀進(jìn)行梯度擴增時(shí)的溫度準確性會(huì )更差
選擇中間溫度可以消除儀器溫度差的影響。
另外，進(jìn)行溫度梯度時(shí)模板量的選擇也是非常重要的。
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