**組化抗原修復注意事項

經(jīng)甲醛固定的部分組織細胞，因固定過(guò)程中可能會(huì )形成醛鍵或羧甲基而封閉部分抗原決定簇，使**組化標記敏感性明顯降低，因此在染色前，有些抗原需進(jìn)行修復或暴露。 抗原修復方法可分為化學(xué)方法和物理方法?；瘜W(xué)方法是以酶消化方法，常用胰蛋白酶及胃蛋白酶，配制濃度與消化時(shí)間要適度。常用的物理方法有單純加熱、微波處理和壓加熱。在選用這三種方法時(shí)，浸泡切片的緩沖液的離子強度和pH、加熱的溫度和時(shí)間均影響著(zhù)抗原修復效果。

1、pH的應用范圍及選擇

抗原修復液的pH非常重要，有效的抗原修復pH要比修復液的化學(xué)成分更重要，同樣的修復液隨著(zhù)pH的升染色的強度逐漸增強，但pH范圍為6.0-10.0。目前大公認的好的抗原修復液是pH6.0的檸檬酸鹽緩沖液和pH8.0的EDTA緩沖液。作為通用修復液堿性pH的修復液要比酸性的有效，而對固定很長(cháng)時(shí)間舊的存檔組織，酸性pH的修復液則于堿性的修復液。

2、抗原修復時(shí)應選擇溫度

70-90℃的溫度對未經(jīng)固定的蛋白質(zhì)可發(fā)生變性，但經(jīng)福爾馬林固定的蛋白質(zhì)，溫度必須達到92℃以上方能使其變性。研究結果顯示，溫度為92-98℃是合適的，95℃效果好。

3、抗原修復液必須遵循自然降溫規律，否則效果不好或達不到抗原修復的目的

抗原修復持續時(shí)間過(guò)后，取出放于室溫中讓其慢慢地降溫，不能為了爭取時(shí)間，強行用冰塊或冷水使其降溫。這是因為當溫中的抗原蛋白分子鏈脫離了其他的束縛或聯(lián)結，要有個(gè)自然環(huán)境讓其自然放松下來(lái)，隨著(zhù)溫度的降低，它們會(huì )慢慢地恢復原來(lái)的形態(tài)和構型。

4、盡量使用足量的抗原修復液

應用于抗原修復的液體，定要充足，防止切片干涸。應用大量的抗原修復液時(shí)，由于它的量較大，可延緩液體的沸騰時(shí)間，增加切片受微波輻射的量，對抗原修復將達到徹底。

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