Molecular Devices在細胞成像系統上檢測細胞活性或毒性

Molecular Devices在細胞成像系統上檢測細胞活性或毒性

EarlyTox?細胞完整性試劑盒由系列易于識別活細胞和死細胞的化試劑組成?？捎糜跈z測不同處理對細胞活性的影響，也可評估不同機制產(chǎn)生的細胞毒性，包括凋亡和壞死。該試劑盒設計工作于多種細胞類(lèi)型，貼壁和懸浮均可。簡(jiǎn)單的操作流程和異的試劑表現使其能應用到通量掃描上。

試劑盒中使用了兩種結合DNA的熒光染料，種為細胞膜可穿透的活細胞紅色染料，種為細胞膜不可穿透的死細胞綠色染料。紅色染料可進(jìn)入所有細胞的細胞核，細胞膜是否完整對其無(wú)影響，并可被激發(fā)產(chǎn)生亮紅色熒光信號。綠色染料只能進(jìn)入死細胞并產(chǎn)生亮綠色熒光，此類(lèi)細胞的細胞膜已不完整(圖1)。因此，活細胞和死細胞能通過(guò)成像系統拍攝到的熒光信號被輕易區分和識別到。

SpectraMax? MiniMax? 300細胞成像系統和SoftMax® Pro軟件為EarlyTox細胞完整性試劑盒的應用了成像和數據分析的整套硬件軟件工具。使用儀器的雙通道熒光成像功能以及軟件的單細胞分析功能，可在5分鐘內分析塊96孔板細胞活性。
特點(diǎn)

信號強，縮短曝光時(shí)間，成像速度更快

適用于各種細胞類(lèi)型，應用廣泛

拍照和分析體完成，流程簡(jiǎn)化

方法

HeLa細胞以5000個(gè)/孔的密度接種到黑壁底透384孔板，培養24小時(shí)使其貼壁并生長(cháng)，然后孔中加入具細胞毒性的**。**處理24小時(shí)候，按照試劑盒說(shuō)明書(shū)加入染料標記后檢測細胞活性。操作方法應盡量均，以減少移除培養基、沖洗步驟造成的細胞損失和結果不準確性?？蛇x的遮蔽試劑能用于減少培養基或待測**產(chǎn)生的背景值。

結果

采用SpectraMax MiniMax 300細胞成像系統的綠色(541nm發(fā)射)和紅色(713nm發(fā)射)通道對384孔進(jìn)行通量細胞成像(圖2A)。對紅色通道成像的圖片設置物體大小和熒光閾值，軟件的目標識別功能可自動(dòng)識別每張圖片中的所有細胞核。然后通過(guò)區分只標記紅色的細胞核與同時(shí)標記紅色綠色的細胞核，軟件的分類(lèi)功能將自動(dòng)識別計數活細胞和死細胞(圖2B)。后可輸出系列詳細數據，例如每孔中活細胞占總細胞百分比。SoftMax Pro軟件可進(jìn)行4參數擬合得到有關(guān)**濃度與細胞活性的IC50曲線(xiàn)(圖3)。

結論

同時(shí)使用SpectraMax MiniMax細胞成像系統和EarlyTox細胞完整性試劑盒可以通過(guò)熒光成像快速方便準確地檢測到死細胞和活細胞數目。各種細胞機制導致的細胞毒性均可被識別和定量。SoftMax Pro軟件既可區分活細胞和死細胞的不同染色模式，還可自動(dòng)對數據進(jìn)行曲線(xiàn)擬合，無(wú)需復雜的數據導入導出，節約了數據分析處理時(shí)間。

 
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